Утверждаю

Заместитель Главного

государственного

санитарного врача СССР

А.И.ЗАИЧЕНКО

21 ноября 1985 г. N 4028-85

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ПРИМИЦИДА В РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ И В ПОЧВЕ

С ПОМОЩЬЮ ТОНКОСЛОЙНОЙ И ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

 

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками Госагропрома СССР.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

 

1. Краткая характеристика препарата

 

1.1. Примицид, пиримифос-этил, ПП 211

Контактный инсектицид. Предложен для борьбы с обитающими в почве вредителями, в том числе с проволочниками на картофеле и кукурузе; мухами на луке, моркови и капусте; долгоносиками на сахарной свекле.

1.2. Активное вещество: 0-(2-диэтиламино-6-метилпиримидил-4)-0,0-диэтилтиофосфат.

1.3. Структурная формула:

 

                        CH

            S          /  3

            ││     ---

    (C H O) P -O-//   \\N                                      C  H  N PO S

      2 5  2     \ ___ /                                        13 24 3  3

                 N ---

                       \                                       М.м. 333,4.

                        N(C H )

                           2 5 2

 

1.4. Технический продукт - бесцветная с желтым оттенком маслянистая жидкость. Растворимость в воде при 30 °С 1 мг/куб. м, смешивается со многими органическими растворителями. Устойчив в нейтральной среде, сравнительно быстро разрушается при нагревании с растворами щелочей и минеральных кислот. Выпускается в виде 30% с.п., 50-процентного э.к., 5 и 10-процентных гранул и 20-процентного порошка для обработки семян.

    ЛД   для крыс при оральном введении 140 - 200 мг/кг, при  аппликации на

      50

кожу  1000  -  2000  мг/кг. Токсичен для пчел и большинства других полезных

насекомых.

 

2. Методика определения примицида в растительном

материале и в почве хроматографией в тонком слое

и газожидкостной хроматографией

 

2.1. Основные положения

 

2.1.1. Принцип метода

    Метод   основан   на   извлечении   примицида   из   растительных  проб

50-процентным  водным  ацетоном.  Из  почвы  экстрагируют инсектицид смесью

ацетона с 0,05 н раствором CaCl  в соотношении  1:1.  Очистка  экстрактов -

                               2

способом перераспределения  между  двумя  несмешивающимися  растворителями.

Количественное определение проводят методами газожидкостной хроматографии и

хроматографией в тонком слое.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

 

                                             ГЖХ               ТСХ

 

Минимально детектируемое количество          1 мг              0,5 мкг

Нижний предел определения                    0,001 мг/кг       0,1 мг/кг

Р - размах варьирования, %

  в растениях                                89 - 95           85 - 90

  в почве                                    94 - 98           90 - 95

С - среднее значение определения, %

  в растениях                                32,2              87,5

  в почве                                    95,8              92,5

S - стандартное отклонение, %

  в растениях                                4,56              3

  в почве                                    2,16              3

Доверительный интервал среднего при

Р = 0,95 и n = 5, %

  для растений                               92,2 -/+ 12,6     87,5 +/- 8,3

  для почвы                                  95,8 +/- 5,9      92,5 +/- 8,3

 

2.1.3. Избирательность метода

Другие фосфорорганические инсектициды определению не мешают.

 

2.2. Реактивы, растворы и материалы

 

Гексан, х.ч., ТУ 6-09-3375-78.

Ацетон, х.ч., ГОСТ 2603-79.

Кальций хлористый, ч., ГОСТ 4161-77.

Натрий сернокислый, безводный, ч.д, ГОСТ 4166-79.

Уголь активированный марки Кад-молотый или ОУ-А.

Стекловата.

Хроматографические пластинки "Силуфол-UV-254", ЧССР.

Хроматон N-супер, пропитанный 5% SE-30 (0,125 - 0,160 мм), ЧССР.

Хроматон N-супер, пропитанный 5% XE-60 (0,125 - 0,160 мм), ЧССР.

Хроматон N-супер, пропитанный 5% OV-17 (0,125 - 0,160 мм), ЧССР.

Хроматон N-супер, пропитанный 2% ПЭГС (полиэтиленгликольсукцинат) (0,125 - 0,160 мм), ЧССР.

Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

Водород электролитический.

Сжатый воздух.

Проявляющие реагенты:

1. 0,5% раствор 2,6-дибром-N-хлорхинонимина в гексане (ч., ТУ 6-09-05-63-74), после опрыскивания пластинки нагревают при 110 °С в течение 5 мин.

2. 2% раствор 4-(р-нитробензил)пиридина (ч., ТУ 6-09-15-93-74) в ацетоне, после нагревания хроматограммы при 110 °С в течение 5 мин. и вновь опрыскивают 10% раствором тетраэтиленпентамина (ч., ТУ 6-09-05-804-78) в ацетоне.

3. 0,05% раствор бромфенолового синего (ч.д.а., ТУ 6-09-3719-74) в 0,5% раствора азотнокислого серебра (х.ч., ГОСТ 1277-75), приготовленного на ацетоне. После проветривания хроматограммы и прогревания ее в термостате при 35 - 40 °С вновь опрыскивают 5% раствором уксусной кислоты (х.ч., ГОСТ 18290-72) или лимонной кислоты (х.ч., ГОСТ 3652-69).

Основной стандартный раствор примицида в ацетоне или в гексане - 100 мкг/куб. см.

Рабочие стандартные растворы готовят разбавлением основного раствора - 10 мкг/куб. см, 1 мкг/куб. см, 0,1 мкг/куб. см.

 

2.3. Приборы и аппаратура, посуда

 

Газовый хроматограф "Цвет-106".

Хроматографические колонки стеклянные длиной 1 м и внутренним диаметром 3 мм.

Ротационный вакуумный испаритель, ТУ 25-11-917-74.

Аппарат для встряхивания колб, ТУ 64-1-1081-73.

Холодильник бытовой.

Термостат.

Хроматоскоп (хемоскоп).

Хроматографическая камера, ГОСТ 10565-75.

Колбы конические со шлифами и пробирками на 100 и 250 куб. см, ГОСТ 10394-72.

Колбы круглодонные для отгонки растворителей, ГОСТ 17004-74.

Делительные воронки на 250 куб. см, ГОСТ 8613-75.

Воронки, ГОСТ 8613-75.

Колбы мерные на 100 куб. см, ГОСТ 1770-74.

Микропипетки 0,1 - 0,2 куб. см, ГОСТ 20292-74.

Камера для опрыскивания, ТУ 25-11-430-70.

Опрыскиватель стеклянный, ГОСТ 19391-74.

Микрошприц МШ-10, ТУ 2.833.106.

Пробирки с притертыми пробками на 10 куб. см, ГОСТ 1770-74.

 

2.4. Подготовка к определению

 

Растительную пробу измельчают на кусочки 0,5 х 0,5 х 0,5 куб. см и отбирают среднюю пробу 25 г.

Почву естественной влажности или воздушно-сухую просеивают через сито и для анализа отбирают 10 г.

Отбор проб растений и почвы проводят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб с/х продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными Минздравом СССР 21 августа 1979 г. N 2051-79.

 

2.5. Проведение определения

 

2.5.1. Экстракция и очистка экстрактов

    Анализируемые навески помещают в конические колбы емкостью 250 куб. см.

Растительные  пробы  экстрагируют трижды, заливая 50 куб. см смеси ацетон -

вода  (1:1)  и встряхивая в течение 30 мин. Экстракты отфильтровывают через

бумажный  фильтр.  Объединенные  экстракты помещают на 1 час в холодильник,

после  охлаждения фильтруют через стекловату. Далее экстракты в делительных

воронках  экстрагируют  трижды по 20 мл гексаном. Гексановый слой сливают в

конические колбы с безводным  сернокислым натрием (30 - 50 г) с добавлением

незначительного  количества  активированного  угля (20 - 50 мг) для очистки

экстракта.  Интенсивно  помешивают содержимое колбы и отфильтровывают через

бумажный  фильтр  в  круглодонные  колбы. Отгоняют растворитель до объема 1

куб.  см под вакуумом на ротационном испарителе при температуре не более 40

°С.  При  необходимости  экстракты подвергают дополнительной очистке. После

концентрирования под вакуумом до 1 куб. см остаток растворителя испаряют на

воздухе. К сухому остатку приливают 30 куб. см смеси ацетона с 0,05 н CaCl

                                                                          2

(соотношение   компонентов   1:1),  пробу  переносят в делительную воронку,

фильтруя  через  бумажный фильтр, колбу споласкивают еще 20-ю куб. см смеси

ацетона  с  хлористым  кальцием. В воронку добавляют 30 куб. см гексана для

извлечения  токсиканта.  Гексановую  фракцию  отделяют,  водосолеацетоновую

дважды  промывают  20-ю  куб.  см гексана. Объединенный гексановый экстракт

фильтруют  через слой безводного сернокислого натрия и концентрируют до 0,5

- 1,0 куб. см.

    Почва.  10  г  пробы  экстрагируют  трижды,  заливая 50-ю куб. см смеси

ацетон - 0,05 н  водный раствор CaCl  (1:1) и встряхивая  в течение 30 мин.

                                    2

Экстракты отфильтровывают через бумажный фильтр в делительную воронку и экстрагируют трижды 20-ю куб. см гексана. Гексановый слой сливают в конические колбы на 100 куб. см с безводным сернокислым натрием (30 - 50 г) с добавлением незначительного количества активированного угля (20 - 50 мг) для очистки экстракта. Интенсивно помешивают содержимое колбы и отфильтровывают через бумажный фильтр в круглодонные колбы. Отгоняют растворитель до объема 1 куб. см под вакуумом на ротационном испарителе при температуре не более 40 °С.

2.5.2. Хроматография в тонком слое

Экстракт после определения ГЖХ доупаривают до 0,2 куб. см и наносят при помощи капиллярной пипетки на расстоянии 2 см от нижнего края хроматографической пластинки "Силуфол-UV-254". Если в пробе содержится много инсектицида, то рекомендуется брать часть пробы и наносить экстракт в 3 - 5 точек диаметром не более 0,5 см. Стенки колб тщательно смывают несколькими каплями гексана и также наносят в центр пятна. Справа и слева от пробы наносят стандартные растворы, содержащие 1, 5, 10, 20 мкг действующего вещества препарата в зависимости от количества препарата в пробе. Хроматографические пластинки ставят в камеру для хроматографирования со смесью растворителей гексанцетон в соотношении 4:1. Край пластинки должен быть погружен в смесь растворителей на 0,5 см. Когда фронт растворителя поднимается на высоту 10 см, пластинку вынимают, подсушивают на воздухе и обрабатывают одним из проявляющих реагентов (2.3). Необходимо отметить, что наиболее чувствительным проявителем является 2,6-дибром-N-хлорхинонимин, а также 4-(р-нитробензил)пиридин.

Пластинки "Силуфол-UV-254" можно смотреть под хроматоскопом без предварительной обработки проявителем.

    R  примицида в системе гексан - ацетон (4:1) составляет 0,6 +/- 0,05.

     f

2.5.3. Определение методом газожидкостной хроматографии

После отгонки растворителя к сухому остатку добавляют 1 - 2 куб. см гексана, колбу закрывают пробкой и тщательно обмывают ее внутреннюю поверхность. Аликвотную часть пробы (1 - 5 мкл) вводят в испаритель хроматографа.

Условия хроматографирования приведены в таблице.

 

Таблица

 

УСЛОВИЯ ГАЗОЖИДКОСТНОГО ХРОМАТОГРАФИРОВАНИЯ ПРИМИЦИДА <*>

 

--------------------------------

<*> Хроматограф "Цвет-106" с ТИД, скорость движения ленты самописца 0,2 см/мин.

 

┌─────────────────────────┬───────────┬───────────┬───────────┬───────────┐

│Насадка колонки          │5% SЕ-30 на│5% ХЕ-60 на│5% OV-17 на│2% ПЭГС на

                         хроматоне  хроматоне  хроматоне  хроматоне 

                         │N-супер    │N-супер    │N-супер    │N-супер   

                         │(0,125 -   │(0,125 -   │(0,125 -   │(0,125 -  

                         │0,160 мм)  │0,160 мм)  │0,160 мм)  │0,160 мм) 

                                                                    

│Длина колонки и внутрен- │100 х 3,0  │100 х 3,0  │100 х 3,0  │100 х 3,0 

ний диаметр, см х мм                                                

                                                                    

                               -10        -10          -10│        -10│

│Рабочая шкала            │2 х 10     │2 х 10     │0,4 х 10   │0,4 х 10  

│электрометра, А                                                     

                                                                    

│Скорость потока азота,   │27         │27         │27         │27        

│мл/мин.                                                             

                                                                     

│Скорость потока водорода,│16         │16         │16         │16        

│мл/мин.                                                             

                                                                    

│Скорость потока воздуха, │312        │312        │312        │312       

│мл/мин.                                                             

                                                                    

│Температура колонки, °С  │205        │205        │230        │210       

                                                                    

│Температура испарителя,  │230        │230        │230        │230       

│°С                                                                  

                                                                    

│Время удерживания        │4 мин.     │3 мин.     │3 мин.     │2 мин.    

примицида                │26 сек.    │2 сек.     │15 сек.    │22 сек.   

└─────────────────────────┴───────────┴───────────┴───────────┴───────────┘

 

2.6. Обработка результатов анализа

 

Содержание примицида в исследуемом объекте в случае тонкослойной хроматографии вычисляют по формуле:

 

                                   А

                               Х = -,

                                   Р

 

где:

Х - содержание препарата в пробе, мг/кг;

А - количество препарата, обнаруженное в пробе при сравнении со стандартом, мкг;

Р - навеска исследуемой пробы, г.

Содержание примицида в пробе в случае газожидкостной хроматографии определяют методом стандартов и рассчитывают по формуле:

 

                            S  х Y  х С  х Y

                             2    1    1    3

                        Х = -----------------,

                               S  х Y  х Р

                                1    2

 

    где:

    Х - количество препарата в пробе, мг/кг;

    С  - количество препарата в стандартном растворе, мкг/куб. см;

     1

    S  - площадь пика стандартного раствора, кв. мм;

     1

    S  - площадь пика анализируемого раствора, кв. мм;

     2

    Y  - объем стандартного раствора, введенный в хроматограф, куб. мм;

     1

    Y  - объем анализируемого раствора, введенный в хроматограф, куб. мм;

     2

    Y  - объем экстракта анализируемой пробы, куб. см;

     3

    Р - навеска пробы, г.

 

3. Техника безопасности

 

Соблюдаются обычные требования по технике безопасности, необходимые при работе с органическими растворителями, кислотами и щелочами.

 

4. Разработчики

 

Петрова Т.М., Хамнаева Е.И. - Всесоюзный научно-исследовательский институт защиты растений, г. Ленинград.

 

5. Методические указания апробированы во ВНИИХСЗР (Новикова К.Ф.).

 

 

 


 
© Информационно-справочная онлайн система "Технорма.RU" , 2010.
Бесплатный круглосуточный доступ к любым документам системы.

При полном или частичном использовании любой информации активная гиперссылка на Tehnorma.RU обязательна.


Внимание! Все документы, размещенные на этом сайте, не являются их официальным изданием.
 
Яндекс цитирования