"Методические указания по определению фосфорорганических пестицидов (базудин, гетерофос, карбофос, метафос, фосфамид, этафос) в табаке методом газожидкостной хроматографии" // Технорма.RU

Утверждены

Минздравом СССР

8 июня 1989 г. N 5011-89

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ФОСФОРОРГАНИЧЕСКИХ ПЕСТИЦИДОВ (БАЗУДИН,

ГЕТЕРОФОС, КАРБОФОС, МЕТАФОС, ФОСФАМИД, ЭТАФОС) В ТАБАКЕ

МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Дополнение к N 1911-78 от 27.09.78,

N 4675-88 от 14.07.88

Краткая характеристика препаратов приведена в Унифицированной методике. МДУ базудина в табаке 0,5 мг/кг; МДУ карбофоса в табаке и махорке 1 мг/кг; фосфамида - 0,4 мг/кг. Содержание метафоса в табаке не допускается. МДУ гетерофоса и этафоса в табаке не установлены.

Принцип метода. Метод основан на извлечении пестицидов из табачного сырья диэтиловым эфиром и очистке от балластных веществ путем их осаждения при выпаривании эфира в присутствии 50-процентного водного раствора ацетона. После экстракции препаратов гексаном и хлороформом проводят их качественное и количественное определение на хроматографе с ТИД.

Метрологическая характеристика метода приведена в таблице 25.

Таблица 25

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА

ГАЗОХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ

ФОСФОРОРГАНИЧЕСКИХ ПЕСТИЦИДОВ В ЗЕЛЕНОМ И СУХОМ ТАБАКЕ

┌──────────┬──────────────┬────────────┬────────────┬─────────────┬────────────┐

│ Пестицид │ Внесено │ Среднее │Стандартное │Доверительный│ Предел │

│ │анализируемого│ значение │отклонение, │ интервал │определения,│

│ │ пестицида, │определения,│ % │среднего при │ мг/кг │

│ │ мг/кг │ % │ │ p = 0,95, │ │

│ │ │ │ │ n = 5, % │ │

├──────────┴──────────────┴────────────┴────────────┴─────────────┴────────────┤

│ Зеленый табак │

│ │

│Базудин │0,005 │91,3 │+/- 4,36 │+/- 5,00 │0,005 │

│ │0,05 │92,5 │+/- 4,11 │+/- 4,71 │ │

│ │0,10 │94,6 │+/- 3,98 │+/- 4,57 │ │

│Гетерофос │0,005 │88,1 │+/- 5,76 │+/- 6,61 │0,005 │

│ │0,05 │87,7 │+/- 4,85 │+/- 5,56 │ │

│ │0,10 │89,3 │+/- 4,70 │+/- 5,39 │ │

│Карбофос │0,010 │95,0 │+/- 7,05 │+/- 8,09 │0,010 │

│ │0,10 │97,1 │+/- 6,73 │+/- 7,72 │ │

│ │0,20 │98,8 │+/- 5,58 │+/- 6,40 │ │

│Метафос │0,010 │87,8 │+/- 6,83 │+/- 7,84 │0,010 │

│ │0,10 │89,1 │+/- 5,95 │+/- 6,83 │ │

│ │0,20 │92,7 │+/- 4,72 │+/- 5,42 │ │

│Фосфамид │0,010 │91,6 │+/- 6,42 │+/- 7,36 │0,010 │

│ │0,10 │93,4 │+/- 5,33 │+/- 6,11 │ │

│ │0,20 │93,9 │+/- 5,25 │+/- 6,02 │ │

│Этафос │0,020 │82,5 │+/- 7,35 │+/- 8,43 │0,020 │

│ │0,20 │83,1 │+/- 6,85 │+/- 7,86 │ │

│ │0,40 │87,4 │+/- 5,78 │+/- 6,63 │ │

│ │

│ Сухой табак │

│ │

│Базудин │0,0125 │90,1 │+/- 3,50 │+/- 4,01 │0,0125 │

│ │0,125 │91,3 │+/- 2,11 │+/- 2,40 │ │

│ │0,250 │92,6 │+/- 1,92 │+/- 2,20 │ │

│Гетерофос │0,0125 │87,6 │+/- 4,95 │+/- 5,68 │0,0125 │

│ │0,125 │88,8 │+/- 5,12 │+/- 5,37 │ │

│ │0,250 │89,9 │+/- 4,35 │+/- 4,99 │ │

│Карбофос │0,025 │96,3 │+/- 7,60 │+/- 8,72 │0,025 │

│ │0,25 │97,6 │+/- 6,85 │+/- 7,86 │ │

│ │0,50 │98,7 │+/- 5,84 │+/- 6,70 │ │

│Метафос │0,025 │87,8 │+/- 5,60 │+/- 6,43 │0,025 │

│ │0,25 │90,5 │+/- 3,88 │+/- 4,45 │ │

│ │0,50 │93,0 │+/- 4,31 │+/- 4,94 │ │

│Фосфамид │0,025 │90,5 │+/- 5,05 │+/- 5,79 │0,025 │

│ │0,25 │93,6 │+/- 4,85 │+/- 5,56 │ │

│ │0,50 │94,1 │+/- 4,57 │+/- 5,24 │ │

│Этафос │0,050 │82,8 │+/- 6,80 │+/- 7,80 │0,050 │

│ │0,50 │84,1 │+/- 5,94 │+/- 6,81 │ │

│ │1,00 │89,5 │+/- 5,21 │+/- 5,98 │ │

└──────────┴──────────────┴────────────┴────────────┴─────────────┴────────────┘

Избирательность метода. Метод избирателен в отсутствие актеллика и метилнитрофоса, которые также разрешено применять на табаке.

Реактивы и растворы. Ацетон х.ч. н-Гексан х.ч. Диэтиловый эфир. Хлороформ х.ч. Сульфат натрия безводный х.ч. Хлорид натрия х.ч. Хлороводородная кислота х.ч. Гидроксид натрия х.ч. Хроматон N-супер (0,16 - 0,20 мм) с 3% OV-17. Хроматон N-AW-DMCS (0,25 - 0,315 мм) с 5% SE-30. Хроматон N-супер (0,16 - 0,20 мм) с 5% ПМС-100. Хроматон N-супер (0,16 - 0,20 мм) с 5% XE-60. Азот газообразный особой чистоты. Водород электролитический (СГС-2). Воздух из баллона с редуктором или нагнетаемый компрессором. Вода дистиллированная. Стандартные растворы пестицидов с концентрацией (мкг/мл): базудина - 0,5; 1,0; 2,0; 5,0; гетерофоса - 0,5; 1,0; 2,0; 5,0; карбофоса, метафоса, фосфамида - 1,0; 2,0; 4,0; 10; этафоса - 2,0; 4,0; 8,0; 20.

Приборы и посуда. Хроматограф "Цвет-106" с ТИД. Колонки хроматографические стеклянные длиной 1 и 2 м с внутренним диаметром 3 мм. Аппарат для встряхивания. Испаритель ротационный. Воронки делительные. Колбы: конические нормального шлифа; круглодонные нормального шлифа; мерные на 25; 50 и 100 мл. Воронки химические. Цилиндры мерные. Колба Бунзена. Воронка Бюхнера. Бумажные фильтры "синяя лента". Электромельница. Насос вакуумный ВНВР-1Д. Компрессор ГСВ-0,6/12 модели 155/285. Микрошприц МШ-10.

Подготовка к определению. Подготовка хроматографических колонок и их кондиционирование. Стеклянные колонки моют хромовой смесью, ополаскивают водой, промывают ацетоном, затем хлороформом и гексаном. Колонки просушивают и заполняют сорбентом, используя вакуум. Заполненные колонки кондиционируют, не подключая к детектору, 24 ч при 250 °C (OV-17), 270 °C (SE-30), 235 °C (XE-60 + ПМС-100).

Приготовление стандартных растворов. В мерных колбах на 50 мл взвешивают отдельно по 25 мг каждого пестицида с точностью 0,0001 г. Приливают в каждую колбу 20 - 30 мл ацетона, осторожно взбалтывают до полного растворения препаратов и доливают ацетон до метки. Хранят в холодильнике при температуре не выше +4 °C. Срок хранения 1,5 - 2 мес.

Основной раствор получают смешиванием: 1 мл ацетонового раствора базудина и 1 мл ацетонового раствора гетерофоса, по 2 мл растворов карбофоса, метафоса, фосфамида, 4 мл раствора этафоса. К полученной смеси доливают ацетон до объема 100 мл. Концентрация пестицидов в основном растворе: базудина и гетерофоса по 5 мкг/мл, карбофоса, метафоса и фосфамида - по 10 мкг/мл, этафоса - 20 мкг/мл. Срок хранения основного раствора 3 - 4 недели.

Для анализа готовят рабочие растворы: N 1 - 10 мл основного раствора вносят в мерную колбу на 25 мл и доводят объем раствора ацетоном до метки; N 2 - 10 мл основного раствора вносят в мерную колбу на 50 мл и доводят объем раствора ацетоном до метки; N 3 - 10 мл основного раствора вносят в мерную колбу на 100 мл и доводят объем раствора ацетоном до метки. 1 мкл полученного раствора N 3 содержит (нг): 0,5 базудина, 0,5 гетерофоса, 1 карбофоса, 1 метафоса, 1 фосфамида, 2 этафоса.

Рабочие растворы хранят в холодильнике 2 - 3 недели.

Ход анализа. Экстракция и очистка экстрактов. Сухой табак (20 г) тщательно измельчают (50 г зеленого табака растирают в ступке с 30 г безводного сульфата натрия), помещают в коническую колбу с пришлифованной пробкой, заливают 100 мл диэтилового эфира и экстрагируют на аппарате для встряхивания в течение 30 мин. Декантируют экстракт 2 - 3 мин. и фильтруют через бумажный фильтр на воронке Бюхнера под вакуумом. Экстрагируют еще раз тем же количеством эфира, встряхивая 15 мин. Фильтруют пробу, фильтр промывают 50 мл эфира.

К эфирным вытяжкам в круглодонную колбу прибавляют 75 мл 50-процентного водного раствора ацетона (в объемных процентах) и полностью удаляют эфир под вакуумом на ротационном испарителе при 25 - 29 °C. При этом на стенках вращающейся колбы осаждаются практически все балластные вещества (воски, смолы, пигменты), что объясняется их нерастворимостью в 50-процентном растворе ацетона.

Водно-ацетоновый экстракт, содержащий ФОП, отделяют фильтрованием через бумажный фильтр в делительную воронку. В колбу с осадком прибавляют 50 мл диэтилового эфира, взбалтывают до полного растворения балластов, прибавляют 75 мл 50-процентного водного раствора ацетона и еще дважды повторяют очистку.

К объединенному водно-ацетоновому фильтрату добавляют 25 мл насыщенного водного раствора хлорида натрия и экстрагируют базудин, гетерофос, карбофос, метафос, этафос гексаном три раза порциями по 50 мл, каждый раз энергично встряхивая в течение 1 мин. Фосфамид экстрагируют хлороформом трижды по 25 мл, встряхивая каждый раз по 1 мин.

Гексановые и хлороформные фракции промывают два раза порциями по 10 мл 0,01 н NaOH, два раза по 10 мл 0,01 н HCl, высушивают, фильтруя через слой безводного сульфата натрия (10 - 15 г), и выпаривают под вакуумом при 40 - 45 °C. Следы растворителей удаляют в токе холодного воздуха.

К сухим остаткам прибавляют 1 - 5 мл ацетона и хроматографируют на хроматографе с ТИД.

При использовании неподвижной фазы OV-17 можно экстрагировать сразу все препараты из водно-ацетонового экстракта хлороформом трижды порциями по 25 мл. Промывку экстракта и остальные операции проводят так же, как описано выше.

Идентификация и количественное определение смеси ФОП. Метод

ГЖХ с ТИД. Для анализа используют хроматограф "Цвет-106" с ТИД.

-12

Рабочая шкала электрометра 100 x 10 А. Скорость движения ленты

самописца 200 мм/ч. Дополнительные условия определения приведены в

таблице 26.

Таблица 26

УСЛОВИЯ ХРОМАТОГРАФИРОВАНИЯ ДЛЯ КОЛИЧЕСТВЕННОГО

И КАЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФОП В ТАБАКЕ

┌────────────────────┬────────────────────────────────────────────────────┐

│ Параметры │ Номер колонки │

│ ├────────────┬────────────┬────────────┬─────────────┤

│ │ 1 │ 2 │ 3 │ 4 │

├────────────────────┼────────────┼────────────┼────────────┼─────────────┤

│Насадка │3% OV-17, │5% SE-30, │5% ПМС-100, │5% XE-60 + 5%│

│ │хроматон │хроматон │хроматон │ПМС-100 (1:1 │

│ │N-супер │N-AW-DMCS │N-супер │по массе), │

│ │(0,16 - 0,20│(0,25 - 0,31│(0,16 - 0,20│хроматон │

│ │мм) │мм) │мм) │N-супер (0,16│

│ │ │ │ │- 0,20 мм) │

│Размер колонок │200 x 3 │300 x 3 │100 x 3 │200 x 3 │

│(длина x диаметр), │ │ │ │ │

│мм │ │ │ │ │

│Температура, °C: │ │ │ │ │

│ колонки │180 │185 │195 │190 │

│ испарителя │210 │210 │210 │210 │

│Скорость потока, │ │ │ │ │

│мл/мин.: │ │ │ │ │

│ азота │60 │50 │50 │50 │

│ водорода │17 - 18 │17 - 18 │17 - 18 │17 - 18 │

│ воздуха │200 │200 │200 │200 │

│Относительное время │ │ │ │ │

│удерживания │ │ │ │ │

│(по метафосу): │ │ │ │ │

│ базудина │0,45 │0,55 │0,76 │0,43 │

│ гетерофоса │0,52 │0,52 │0,57 │0,51 │

│ карбофоса │1,19 │1,14 │1,25 │0,97 │

│ метафоса │1,0 │1,0 │1,0 │1,0 │

│ фосфамида │0,81 │0,76 │0,67 │0,86 │

│ этафоса │1,50 │1,53 │1,80 │1,22 │

│Абсолютное время │6 мин. 46 с │5 мин. 15 с │3 мин. 18 с │5 мин. 53 с │

│удерживания метафоса│ │ │ │ │

└────────────────────┴────────────┴────────────┴────────────┴─────────────┘

Колонку с неподвижной фазой OV-17 используют как основную при качественном и количественном определении препаратов. Можно применять и другие колонки (см. табл. 26). На колонке с фазой OV-17 минимально детектируемое количество базудина и гетерофоса - 0,5 нг, карбофоса, метафоса, фосфамида - 1 нг, этафоса - 2 нг. Линейный диапазон детектирования: базудина и гетерофоса 0,5 - 5 нг, карбофоса, метафоса, фосфамида 1 - 15 нг, этафоса 2 - 30 нг. Хроматографируют 2 - 3 мкл конечного экстракта пробы.

Обработка результатов анализа. Количественное определение проводят методом соотношения со стандартами по высоте пиков. Содержание пестицидов в анализируемой пробе вычисляют как среднее значение из трех параллельных определений.

Количество пестицида в анализируемой пробе (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:

CH V V

1 ст 2

X = --------,

H V P

ст 1

где:

C - концентрация пестицида в стандартном растворе, мкг/мл;

H - высота пика пестицида в анализируемой пробе, мм;

H - высота пика пестицида стандартного раствора, мм;

ст

V - объем пробы, введенной в хроматограф, мкл;

V - общий объем анализируемой пробы, мл;

V - объем введенного в хроматограф стандарта, мкл;

ст

P - навеска исследуемого образца табака, г.

Требования безопасности. При анализе необходимо выполнять правила безопасности, рекомендованные для работы с органическими растворителями, пестицидами и сжатыми газами.